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科普10x空间转录组测序到底如何应用

来源:条形码 时间:2023/5/7
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空间转录组是一种用于从空间层面上解析RNA-seq数据的技术,从而解析单个组织切片中的所有mRNA。空间条形码逆转录oligo(dT)引物在显微镜载玻片表面的有序附着,使得在mRNA样品处理和后续测序过程中位置信息的编码和获取成为可能。

单细胞RNA测序或组织样本RNA测序,均无法为研究人员提供精确的空间信息。通过空间转录组技术可获取组织中具体位置的转录信息,为研究和诊断提供有效数据支撑。

△欧易生物空间转录组测序技术已通过10xGenomicsCSP官方认证

应用方向

10xGenomics空间转录组技术可以应用于肿瘤、免疫、发育、神经和病理等研究方向

技术优势

广泛的样本适用性:适合大多数组织类型

简单的操作流程:一个工作日内可完成从组织切片到文库的工作流程

较高的分辨率:每个捕获区域包含个spots,每个spots捕获平均1-10个细胞

易于与组织学分析的实验室方法和工具集成

实验原理

10xGenomics空间转录组用于文库构建的每张载玻片上有四个捕获区域,每个捕获区域的大小为6.5x6.5mm,包含个被条形码标记的点(barcodedspots),每个点的直径为55μm,点和点之间中心的距离为μm,并且每个点都有一个唯一的barcode序列。

组织切片的细胞中会释放出mRNA,迁移到每个spot的mRNA会被标记上相应的barcode序列,然后进行文库构建并进行测序。

最后,根据数据的条形码信息对数据进行分析,以确定哪些数据来自哪个位置,从而实现空间基因表达的可视化。

实验流程

10XVisium的实验主要分为两部分:组织学板块和组学板块。组织学板块包括样品的包埋、切片、固定、染色及成像,记录切片的形态学信息;组学板块包括cDNA的合成、扩增、接头连接和测序,记录切片的转录本信息和空间位置信息。

具体实验流程如下:

A、切片制备和优化:取新鲜组织、冷冻、切片,并进行HE染色成像,优化确定切片是否覆盖靶向区域。

B、切片固定和透化:将组织切片放置在含有与RNA结合捕获探针的载玻片上,并进行固定和透化,使细胞中的mRNA得到释放,并结合到相应的捕获探针上,从而获取基因表达信息。

C、逆转和文库构建:以捕获的RNA为模板,进行cDNA合成,和测序文库制备。

D、高通量上机测序:对制备好的测序文库,进行二代高通量短读长测序。

E、数据可视化分析:结合HE结果,确定哪些基因有表达,表达量高低,以及这些基因的空间位置信息

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