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来源:条形码 时间:2022/6/16

MicroRNAs(miRNAs)是一种小型的非编码RNA分子,具有18~25个核苷酸,参与基因表达和细胞活动的转录后调节,包括细胞增殖和凋亡。miRNAs的异常表达水平与肿瘤进展和转移相关,可作为疾病早期诊断的有价值的生物标志物。因此,准确、快速的非侵入性检测miRNAs的数量对于癌症的早期诊断和癌症治疗过程中的疗效监测具有重要意义。然而,miRNAs的定量检测仍然是一个挑战,因为它们在血液中表达水平低,难以从血液样本中提取/浓缩,并且极易降解。因此,迫切需要开发一种能够同时检测多种miRNAs且具有高灵敏度和特异性的复合平台。

本文报道了一种新型杂交链式反应(hybridizationchainreaction,HCR)编码载体,即PDA

PhC条形码,该载体的二氧化硅光子晶体(Photoniccrystal,PhC)颗粒具有明显的优势,例如出色的光学性能,显著的编码稳定性,无任何荧光背景和光漂白(不足:缺乏手段进行生物分子固定);而多巴胺(dopamine,DA),贻贝中粘附蛋白的组成,作为生物粘合剂,它含有许多儿茶酚和醌,使能够修饰PhC颗粒的表面以固定生物分子。本文中,作者将PhC与DA结合起来,为多重miRNAs检测提供了一个新的平台。

首先,将来自微流体液滴中的二氧化硅纳米颗粒自组装获得的PhC条形码分散到多巴胺DA中,由于多巴胺的自聚合获得PDA

PhC颗粒。PDA含有丰富的官能团,邻苯二酚基团在碱性条件下很容易被氧化成醌式结构,从而与含有巯基、氨基或亚氨基的亲水或疏水有机分子发生迈克尔加成和席夫碱反应,将连有氨基的功能分子H1引入材料表面(图1a)。当溶液中含有靶标microRNA时,会与PDA

PhC条形码上的探针H1进行杂交,H1茎环被打开,进而与引物H2杂交,此时,靶标miRNAs被置换出来参加到下一轮的循环当中;PDA

PhC条形码上的双链DNA作为启动剂,和修饰了Cy5荧光基团的茎环引物H3、H4发生杂交链式反应,进而通过测量PhC颗粒上的荧光信号达到检测miRNAs的目的(图1b)。

图1.(a)PDA

PhC条形码制备和探针固定的示意图。(b)基于靶标循环和杂交链式反应的PDA

PhC条形码用于miRNAs检测的示意图。

除此之外,作者还通过改变PhC条形码的粒径可以调整PDA

PhC的颜色进行多重miRNAs的检测(如图2)。因此,本文所提出的策略可以作为一个新的、潜在的、多重生物标志物的检测平台用于疾病的诊断。

图2.PDA

PhC条形码对三种microRNA的检测。

参考:ZhangD,BianF,CaiL,etal.Bioinspiredphotonicbarcodesformultiplexedtargetcyclingandhybridizationchainreaction[J].BiosensorsBioelectronics,,.

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