神经胶质细胞为少突胶质细胞、星形胶质细胞、少突胶质祖细胞、室管膜细胞、小胶质细胞等细胞的统称。中枢神经系统的损伤或感染,小胶质细胞和星形胶质细胞均经历形态、分子和功能的重塑。同属胶质细胞的“两兄弟”小胶质细胞和星形胶质细胞是如何进行高效“对话”的。
多发性硬化症(MS)、实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)等自身免疫大脑疾病中,星形细胞的激活是由T细胞和其他外周免疫细胞调节的。尽管目前单细胞测序技术比较成熟,但是并不能轻易的捕捉到部分细胞群体之间的相互作用。
近日,哈佛大学医学院医院FranciscoJ.Quintana研究团队在Science杂志上发表文章,开发了基于病毒载体的单细胞测序技术,能够有效实现细胞之间相互作用的分子靶点的识别。
研究人员开发出了识别星形胶质细胞相互作用的单细胞测序技术RABID-seq。他们首先构建了能够表达荧光mRNA”条形码“的糖蛋白缺陷型狂犬病病毒(RabDG)。由于伪狂犬病病毒会感染表达包膜蛋白A或包膜蛋白A型受体的细胞,这两类发生相互作用的细胞就会带上mRNA”条形码“,随后可进行单细胞测序。
RabDG实验标记流程
研究人员向表达糖基蛋白及胞膜受体的GFAP转基因小鼠,注射RabDG病毒后,该病毒首先感染能够表达胞膜受体的星形胶质细胞上,随后这些星形胶质细胞被标记上mRNA的”条形码”。
此外,星形胶质细胞产生的新病毒颗粒将狂犬病糖蛋白G整合到其包膜中,从而获得了感染邻近细胞的能力。通过这样的方式可以研究星形胶质细胞和其临近细胞相互作用的分子机制。进一步将上述病毒注射到EAE模型小鼠中,通过RABID-seq技术分析了个带有RabDG
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